抗性淀粉檢測物質的提取及轉化
更新時間：2018-10-29 點擊次數：2294次
抗性淀粉檢測物質的提取及轉化
抗性淀粉檢測可以影響人和動物日糧中各種養分的消化與吸收,對人的健康有利。在延緩糖尿病人餐后血糖上升、肥胖控制、預防腸道疾病、降低血中膽固醇和能量消化率等具有重要的生理功能。
抗性淀粉檢測原理
樣品經前處理后，先在沸水浴中經耐高溫α-淀粉酶水解，使可消化淀粉轉化成葡萄糖，離心，棄去上清液，沉淀加入一定濃度的KOH使之溶解，經葡萄糖淀粉酶作用將其轉化成葡萄糖，用葡萄糖試劑盒測定葡萄糖含量，乘以0.9即換算成抗性淀粉含量。
用于抗性淀粉檢測的儀器設備
a)離心機
b)電熱恒溫水浴鍋
c)酸度計
d)分光光度計
e)電子分析天平
f)容量瓶（100mL、1000mL）
選擇的試劑
除特殊說明外，實驗用水為蒸餾水，試劑為分析純。
a)乙mi
b)耐高溫α-淀粉酶（120,000NU/mL）
c)2mol/L氫氧化鉀溶液
d)磷酸鹽緩沖液（pH5.8）
分別稱取磷酸二氫鉀8.34g與磷酸氫二鉀0.87g,，加適量水使其溶解，定容至1000mL。
e)醋酸鹽緩沖液(pH4.4)
分別量取0.2mol/L醋酸溶液30.5mL及0.2mol/L醋酸鈉溶液19.5mL混勻。
f)葡萄糖淀粉酶（100,000U/mL）
g)2mol/L鹽酸溶液
h)葡萄糖試劑盒
樣品前處理
糧食、豆類、糕點、餅干等較干燥的樣品
稱取2g～5g（到0.001g）磨碎過40目篩的樣品，置于放有慢速濾紙的漏斗中，用30mL乙mi分三次洗去樣品中脂肪，棄去乙mi。
蔬菜、水果、各種糧豆含水熟食制品
按1：1加水在組織搗碎機中搗成勻漿（蔬菜、水果需先洗凈、涼干，取可食部分）。稱取5g～10g勻漿（液體樣品可直接量?。?，于250mL錐形瓶中，加30mL乙mi振搖提?。ǔ悠分兄荆?，過濾去除乙mi，再用30mL乙mi淋洗兩次，棄去乙mi。
抗性淀粉檢測含量測定
抗性淀粉提取及轉化
取0.5g試樣放入50mL離心管，加入10mL(pH5.8)磷酸鹽緩沖溶液和1mL耐高溫α-淀粉酶，沸水浴30min，冷卻至室溫，離心(5000r/min，20min)棄上清液；加入10mL蒸餾水，洗滌沉淀，離心棄上清液(該步驟至少重復一次)，加入6mL2mol/LKOH溶解沉淀，室溫下振蕩30min，促進沉淀溶解，以2mol/LHCl調pH至中性，加入5mL醋酸鹽緩沖液(pH4.4)和1mL葡萄糖淀粉酶。60℃水浴45min。離心(5000r/min，20min)，收集上清液，再用10mL蒸餾水洗滌沉淀(該步驟重復兩次)，離心(5000r/min，20min)，取上清液。合并所收集上清液，定容至100mL容量瓶中。用葡萄糖試劑盒測樣品中葡萄糖含量，乘以0.9即為抗性淀粉的量。
葡萄糖含量的測定
根據葡萄糖試劑盒以及使用說明書，用分光光度計測定樣品中葡萄糖的含量，以蒸餾水為空白管，以試劑盒自帶標準液為標準管，把試劑與工作液按一定比例混合，置37℃水浴15min，以空白管調零，在505nm波長下讀取各管吸光度值。
