MBG4試劑含有單一底物，即4,6- o-芐基-2-氯-4-硝基苯基-β-(31-β- d -纖維三糖苷)(BCNPBG4)。芐基縮醛基團可防止任何外作用水解酶如β-葡萄糖苷酶或纖維生物水解酶的水解作用。
混合連接β-葡聚糖酶(endo1,3:1,4 -β-葡聚糖酶)/地衣酶(EC 3.2.1.73)特異地從底物中釋放2-氯-4-硝基b酚(CNP)。CNP的釋放速率與樣品中β-葡聚糖酶/地衣酶的活性直接相關。加入pH = 10.0的Tris緩沖液，反應終止，酚色顯現。
注意底物不被β-葡萄糖苷酶或纖維生物水解酶水解。底物可以被某些纖維素內酶水解(如木霉)，但這并不會導致吸光度的增加。
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